扩增拒绝突变系统-团员酶链反应（ARMS-PCR）和下一代测序（NGS）均能检测非小细胞肺癌（NSCLC）患者的EGFR敏锐性突变。本研究旨在明确ARMS-PCR与NGS在检测NSCLC患者EGFR L858R与21番外显子陌生突变共发情况时的互异，以及此类患者对EGFR-TKIs的诊治应付。对5033例NSCLC患者的肿瘤组织（起原于术后标本、肺穿刺活检或纤维支气管镜查验，经甲醛固定、石蜡包埋处罚，即FFPE）同期采用NGS和ARMS-PCR检测EGFR突变。研究东谈主群的临床及病理尊府通过中国医学科学院肿瘤病院的电子病历系统回归性网罗，并通过电话或短信进行随访。采用Spearman相关分析相比L858R与陌生EGFR 21番外显子突变的突变等位基因频率（MAF）云开体育，采用Kaplan-Meier法和Log-rank熟识分析糊口数据。

共检测出1024例（20.3%）患者存在EGFR L858R突变，其中54例患者经NGS检测发现同期存在L858R与陌生EGFR 21番外显子突变，而ARMS-PCR未检出这些突变。EGFR 21番外显子最常见的共发致病性突变包括V834L、K860I和L833V。在上述54例患者中，23例经受EGFR-TKIs动作一线诊治，中位无进展糊口期（PFS）为16.7个月[95%CI：10.1-50.8个月]，其中15例使用第一代EGFR-TKIs，2例使用第二代EGFR-TKIs，6例使用第三代EGFR-TKIs。值得注宗旨是，NGS检测发现10例患者同期存在L858R与K860I突变，而ARMS-PCR检测EGFR突变效果均为阴性。在这10例患者中，3例经受EGFR-TKIs一线诊治，中位PFS为11.0个月，客不雅缓解率（ORR）为100.0%。此外，3例经NGS检测发现L858R与K860I共发突变的患者在术后经受缓助靶向诊治，中位无病糊口期为10.0个月。

存在EGFR L858R与K860I共发突变的NSCLC患者可从EGFR-TKIs诊治中获益，此类突变可通过NGS检测检出，而ARMS-PCR无法检出。因此，淡薄对NSCLC患者采用NGS检测以明确EGFR突变等运调遣异，尤其是在ARMS-PCR检测效果为阴性时。

研究布景

肺癌是各人癌症相关牺牲的首要原因，其中NSCLC是最常见的组织学类型。EGFR突变是NSCLC中最常见的致癌运调遣异之一。常见EGFR突变（L858R和19外显子缺失）约占总计EGFR突变的80-85%，被庸碌觉得是EGFR-TKIs临床疗效淡雅的强权衡因子。频年来，EGFR-TKIs已成为很多佩戴常见EGFR突变的晚期NSCLC患者的圭臬诊治决策，其中L858R是中国患者中最常见的亚型。但是，对于存在复杂EGFR突变（如L858R与陌生EGFR第21外显子突变共发）的NSCLC患者，其诊治反应仍未得到充分研究。相等是，由于试验入组艰苦，对于此类陌生EGFR突变患者诊治计策的灵验临床凭证仍然短少。

当今，NGS和ARMS-PCR均被庸碌推选用于检测NSCLC中的可靶向EGFR变异。ARMS-PCR动作一种能在极少样本中快速扩增靶DNA序列且资本较低的经典神情，已在多种恶性肿瘤中庸碌诓骗，但此前的研究标明，约5%的NSCLC患者佩戴ARMS-PCR无法检出的陌生EGFR突变。NGS具有高通量检测地方基因总计区域细微突变的才气，频年来已透顶蜕变了精确医学中的基因组测序，但其对特定设立和专科学问的需求以及繁琐耗时的检测进程限度了其提高。大大都相比不同检测神情的研究汇注于常见EGFR突变，而对于ARMS-PCR与NGS在检测复杂EGFR突变（如L858R与陌生EGFR第21外显子突变共发）方面的互异知之甚少。

为明确ARMS-PCR与NGS在L858R与陌生EGFR第21外显子突变共发的NSCLC患者中的检测互异，本研究在大样本部队中同期进行了NGS和ARMS-PCR检测。此外，通过分析L858R与陌生EGFR第21外显子突变（尤其是K860I）的MAF关联，评释ARMS-PCR假阴性效果的原因。终末，网罗并分析患者一线经受EGFR-TKIs诊治的反应情况，为L858R与陌生EGFR第21外显子突变并发的NSCLC患者探索有远景的检测和诊治计策。

研究效果

5033例患者ARMS-PCR与NGS谐和检测效果：

2021年1月1日至2023年12月1日历间，对5033例NSCLC FFPE标本同期进行ARMS-PCR与NGS检测，共检出2414例（48.0%）存在EGFR突变。其中，1024例（20.3%）佩戴EGFR L858R突变，在这部分患者中，有54例经检测发现同期存在L858R与陌生EGFR 21番外显子突变（图1A）。共发EGFR 21番外显子陌生突变的散播情况如图1B所示。本研究中最常见的共发EGFR 21番外显子突变规范为V834L（24.07%，13/54）、K860I（18.52%，10/54）和L833V（14.81%，8/54）。

图1

NSCLC患者中L858R与K860I共发突变情况：

为明确NSCLC患者的致癌运调遣异，总计病例均同期经受NGS与ARMS-PCR检测。效果线路，NGS可检出L858R与陌生EGFR 21番外显子突变的共发情况，而ARMS-PCR仅能识别EGFR L858R突变。值得注宗旨是，NGS在10例患者中检测到L858R与K860I共发突变，而ARMS-PCR对这10例患者的EGFR突变检测效果均为阴性（图2）。

图2

此外，通过Spearman相关分析发现，L858R与共发的EGFR 21番外显子陌生突变的MAF具有高度一致性（n=54，P<0.001，图3A）。具体而言，在L858R与K860I共发突变的患者中，L858R的MAF与K860I的MAF呈权臣相关（n=10，P<0.001，图3B），这辅导K860I与L858R可能位于并吞突变克隆的并吞条等位基因上。另外，在本研究中最常见的共发EGFR 21番外显子突变（V834L）与L858R的MAF也具有高度一致性（n=13，P<0.001）。

图3

靶向诊治与临床结局：

在54例L858R与EGFR 21番外显子陌生突变共发的NSCLC患者中，23例经受EGFR-TKIs动作一线诊治，其中15例使用第一代EGFR-TKIs，2例使用第二代EGFR-TKIs，6例使用第三代EGFR-TKIs。中位随访时代为24.5个月，限度数据截止日历，共不雅察到15例（65.2%）患者出现疾病进展。最好疗效评估效果线路，部分缓解（PR）7例（31.8%）、疾病褂讪（SD）10例（45.4%）、疾病进展（PD）1例（4.5%）、疗效未评估（NA）4例（18.1%）。ORR为30.4%[95%CI：10.1-50.8%]，中位PFS为16.7个月（95%CI：12.8-20.7个月）（表1）。一线经受EGFR-TKIs诊治时，L858R与EGFR 21番外显子陌生突变共发患者与单纯L858R突变患者的疗效互异无统计学瞻仰。值得选藏的是，1例L833V与L858R共发突变的患者经受埃克替尼诊治，PFS达18.4个月。疾病进展后对淋谀媚活检标本再次进行DNA-NGS检测，效果线路得回性K852T突变可能是该患者独一的耐药机制。

表1

在10例L858R与K860I共发突变的患者中，3例经受EGFR-TKIs一线诊治，中位PFS为11.0个月，ORR达100.0%（表2）。此外，3例L858R与K860I共发突变的患者在术后经受缓助靶向诊治，中位DFS为10.0个月。典型病例情况：1例56岁女性患者，右肺上叶肿瘤大小为6.1 cm×6 cm，伴2.3 cm×1.8 cm脑调遣灶，确诊为IV期（T4N1M1b）肺腺癌。NGS检测发现其存在L858R（MAF 21.1%）与K860I（MAF 22.8%）共发突变，而ARMS-PCR检测未检出上述突变。该患者经受达可替尼一线诊治，得回11个月的PR（图4）。诊治失败后，对右肺上叶病灶再次活检并进行NGS检测，发现新出现的T790M突变（MAF 34.0%）为其耐药机制。随后患者口服奥希替尼，得回5个月的SD（图4）。

表2

图4

讨 论

NSCLC中可不雅察到EGFR L858R与21番外显子陌生突变共发的情况，但是此类患者的检测特征及诊治应付仍不解确。本研究发现，与L858R共发最常见的EGFR 21番外显子突变规范为V834L（24.07%，13/54）、K860I（18.52%，10/54）和L833V（14.81%，8/54），且这些突变均无法通过ARMS-PCR检出。尤其值得注宗旨是，EGFR L858R与K860I共发突变呈现ARMS-PCR检测阴性、NGS检测阳性的特色，且经NGS检出此类突变的NSCLC患者可从EGFR-TKIs诊治中获益。

ARMS-PCR是一种采纳性扩增靶DNA序列的经典神情，庸碌用于EGFR突变检测，但该技能无法识别陌生或未知突变。有研究标明，跳跃40%佩戴EGFR 20番外显子插入突变（ex20ins）的NSCLC患者可能被ARMS-PCR漏检；此前的研究也发现，约5%佩戴陌生EGFR突变的NSCLC患者无法通过ARMS-PCR检出。与之违反，NGS凭借其大边界并行测序才气和高机灵度，大约拆伙大边界基因组测序。本研究中，经NGS检出存在EGFR 21番外显子陌生突变共发的NSCLC患者，其突变均未被ARMS-PCR识别；更迥殊的是，NGS检出的L858R与K860I共发突变患者，ARMS-PCR检测效果均为阴性。此外，L858R与K860I的MAF具有高度一致性，这辅导两种突变可能位于并吞突变克隆的并吞条等位基因上。由此推断，由于L858R（c.2573 T>G）与K860I（c.2579 A>T）的碱基替换位点距离过近，导致ARMS-PCR的引物无法常常团结，最终出现皆备假阴性效果；而基于杂交拿获技能的NGS可通过探针同期检测这两种突变，从而幸免漏检。

此前已有研究研究复杂EGFR突变与EGFR-TKIs诊休养效的关联。Zhang等东谈主分析了佩戴EGFR 19番外显子缺失（Del-19）/21番外显子L858R与陌生EGFR突变共发的晚期腺癌患者一线经受EGFR-TKIs诊治的应付情况，效果线路中位PFS为9.7个月，ORR为60.0%。但对于L858R与EGFR 21番外显子陌生突变共发患者的EGFR-TKIs诊休养效，当今相关研究仍较为有限。本研究证实，此类共发突变患者可从EGFR-TKIs诊治中获益；尤其紧要的是，经NGS检出（ARMS-PCR漏检）的L858R与K860I共发突变患者，对EGFR-TKIs应付淡雅，中位PFS达11.0个月，中位无病糊口期（DFS）达10.0个月。此外，研究者不雅察到1例L858R与K860I共发突变患者，经受达可替尼诊治后得回11个月的PR，后续因出现T790M突变（常见EGFR突变患者对EGFR-TKIs耐药的最主要机制）而诊治失败。

本研究存在一定局限性：率先，纳入的L858R与EGFR 21番外显子陌生突变共发患者样本量相对较少，需在更大边界部队中开展进一步研究以考据论断；其次，经受第二代或第三代EGFR-TKIs诊治患者的随访时代较短；终末，研究东谈主群中21例患者经受了早期手术切除，10例患者失访。由于第一代与第三代EGFR-TKIs的疗效存在权臣互异，且本研究为回归性研究、患者诊治决策存在个体互异，因此难以平直对比不同决策的ORR、PFS等疗效地方。异日需开展前瞻性部队研究，蔓延随访时代并扩大突变检测边界，以考据本研究论断并发达耐药机制。

本研究标明，ARMS-PCR无法检出NSCLC患者中的EGFR L858R与K860I共发突变，而NGS可提供全面的突变信息，有助于优化临床结局。在临床推行中，若仅依赖ARMS-PCR检测效果，可能导致L858R与K860I共发突变患者错失本研究证实灵验的EGFR-TKIs诊治契机。因此，应推选NSCLC患者采用NGS检测EGFR突变等运调遣异，尤其是在ARMS-PCR检测效果为阴性时。

参考文件：

Shi H, Li W, Guo L云开体育, Ying J, Hu X. Concurrent EGFR L858R and K860I mutations: PCR-negative but NGS-positive alterations that respond to EGFR inhibitors in non-small cell lung cancer. J Thorac Dis. 2025;17(8):5588-5596. doi:10.21037/jtd-24-1787